TUGAS PENDAHULUAN

1. JELASKANLAH PRINSIP HITUNG CAWANG UNTUK ANGKA LEMPENG TOTAL
2. JELASKAN,APAKAH PERBEDAAN MENGGUNAKAN PCA DAN NA SEBAGAI MEDIA YANG DIGUNAKAN UNTUK HITUNG ANGKA LEMPENG TOTAL ?
3. JELASKAN CARA MENGHITUNG TOTAL SPORA BAKTERI PADA MAKANAN

4. MENGAPA UNTUK MENGHITUNG SPORA BAKTERI HARUS DILAKUKAN PEMANASAN?
5. BERAPAKAH SUHU YANG DIGUNAKAN UNTUK PEMANASAN SPORA BAKTERI?
6. JELASKANLAH CARA MENGHITUNG TOTAL KAPANG DAN KHAMIR PADA MAKANAN

PENGAMBILAN, PENANGANAN DAN PENGIRIMAN SAMPEL PEMERIKSAAN AIR

Pengambilan, Penanganan, dan Pengiriman Spesimen

Pengambilan specimen air harus dilakukan secara steril guna memastikan tidak terdapatnya organisme yang mengkontaminasi.

Sampel air dapat berasal dari: Air kran, air sumur, sumber air yang terbuka seperti air danau atau sungai.

            Cara pengambilan specimen :

1.      Air keran

a.       Bersihkan kran dari setiap benda yang menempel yang mungkin dapat menganggu, dengan kain bersih, bersihkan ujung kran dari setiap kotoran atau debu.
b.      Putar sampai kran terbuka sehingga air mengalir secara maksimal dan biarkan air mengalir selama 1-2 menit.
c.       Mulut kran disterilkan dengan cara membakar dengan lidi kapas yang telah dicelupkan dalam ethanol 70% atau dengan menggunakan pembakar dari gas.
d.      Buka tali pengikat dan kertas pembungkus botol.
e.       Buka tutup botol dengan tangan kiri, botol dipegang dengan tangan kanan. Untuk mencegah masuknya debu yang mungkin mengandung mikroorganisme, penutup dipegang dengan muka menghadap ke bawah.
f.       Sambil memegang penutup, air kran ditampung hingga ¾ bagian botol. Diisi hanya ¾ bagian botol (dengan menyisakan udara diatasnya) dengan maksud agar air dapat dikocok sebelum dianalisa.
g.      Tutup botol dengan hati-hati.
h.      Kemudian bagian tutupnya dibungkus dengan kertas steril tadi.
i.        Sekeliling leher botol diikat dengan tali. Kemudian pada botol diberi label dan catat suhu air tersebut.

2.      Air sumur

a.       Buka bungkus botol yang telah steril, bilas tangan dengan ethanol 70%, kemudian buka tutup botol dan letakkan di atas bungkus yang steril tadi.
b.      Dengan posisi mulut botol menghadap ke atas, ulurkan botol tersebut ke dalam sumur secara perlahan-lahan, jangan sampai botol tersebut menyentuh dinding sumur. Celupkan seluruh permukaan botol ke dalam air sumur hingga mencapai dasar.
c.       Tarik botol yang telah terisi penuh dengan air secara perlahan-lahan, buang ¼ bagian dari air yang ada dalam botol tersebut.
d.      Tutup kembali botol tersebut, bungkus dengan kertas steril tadi dan ikat dengan tali pada bagian leher botol. Kemudian beri label.

3.      Air dari sumber air yang terbuka seperti: danau, sungai, dll

a.       Botol dipegang pada bagian bawah, celupkan ke dalam air dengan leher botol menghadap miring ke bawah, celupkan botol tersebut hingga mencapai kedalaman ± 20 cm.
b.      Kemudian angkat botol tersebut dalam air dengan mulut botol menghadap ke atas. Bila perlu mulut botol berhadapan dengan arah aliran air.
c.      Setelah botol terisi air, tutup kembali botol dengan kertas pembungkus dan ikat dengan tali pada bagian leher botol tersebut. Kemudian beri label.

Cara penanganan dan pengiriman specimen:

Pengiriman specimen dilaksanakan secepetanya dalam waktu kurang dari 24 jam. Sebelum dikirim, sampel air disimpan dalam refrigerator. Bila perjalanan diperkirakan akan memakan waktu lebih dari 3 jam, specimen harus dikirim dalam suasanan dingin, pada suhu 4-10˚C. sampel air yang akan dikirim harus dikemas terlebih dahulu.

Botol dipak dalam kotak kayu yang telah diberi tanda: ATAS dan BAWAH, kemudian kotak kayu diberi penyangga (kayu) untuk menjaga agar botol tetap menghadap ke atas. Dapat juga digunakan wadah dari metal dengan ukuran yang sesuai dengan ukuran sampel tersebut. Bungkus wadah tersebut dan cantumkan alamat yang dituju dengan jelas.

Pengiriman specimen dilakukan dengan memperhatikan sungguh-sungguh syarat pengiriman specimen. Spesimen dikirim dengan surat pengantar.

PEMERIKSAAN BAKTERIOLOGI AIR

PEMERIKSAAN BAKTERIOLOGI AIR

PENDAHULUAN

Kualitas air digunakan masyarakat harus memenuhi syarat kesehatan, agar dapat terhindar dari berbagai penyakit maupun gangguan kesehatan yang dapat disebabkan oleh air. Untuk mengetahui kualitas air dimaksud, perlu dilakukan pemeriksaan laboratorium yang mencakup antara lain pemeriksaan Bakteriologi air. Pemeriksaan Bakteriologi air meliputi pemeriksaan Most Probable Number (MPN) dan angka kuman. Pemeriksaan MPN dilakukan untuk pemeriksaan kualitas air minum, air bersih, air badan air, air permandian umum, air kolam renang, dan pemeriksaan angka kuman dilakukan untuk pemeriksaan kualitas air kolam renang.

A.    PEMERIKSAAN MOST PROBABLE NUMBER (MPN)

I.       Bahan Pemeriksan    : Air minum, air bersih, air badan air, air permandian umum, air kolam renang.

II.    Persiapan Wadah

a.       Untuk sampel berasal dari keran:

Siapkan wadah botol berukuran 250 ml, isi dengan 5 tetes cairan Sodium Thiosulfate 10%, kemudian botol ditutup.

b.      Untuk sampel air sumur:

Tanpa pemberian Sodium Thiosulfate, pada bagian dasar botol diberi pemberat yang diikatkan dengan kawat. Pada leher botol diikatkan tali dengan panjang 20 meter.

c.       Untuk sampel air dari sumber air yang terbuka, seperti sungai, danau, dll:

Sediakan wadah botol berukuran 250 ml tanpa pemberian Sodium Thiosulfate.

d.      Sebelum disterilisasi, semua botol (beserta tali dan pemberatnya) dibungkus dengan kertas coklat atau kertas timah, dan diikat dengan benang.

e.       Sterilisasi dalam autoclave selama 30 menit pada suhu 120˚C dengan tekanan 1 atmosfir.

III. Alat-alat, media dan reagensia

Alat-alat yang diperlukan                     :

1.      Oven

2.      Autoclave

3.      Incubator

4.      Waterbath

5.      pH meter

6.      Timbangan

7.      Water deionizer

8.      Botol dilusi

9.      Pipet (1 dan 10 ml)

10.  Api gas

11.  Tabung reaksi 16 x 160 mm yang didalamnya berisi tabung durham dengan posisi terbalik

12.  Rak tabung

13.  Ose

14.  Peralatan laboratorium umum: botol erlemnmeyer, beaker glass.

Media dan reagensia yang diperlukan :

§  10% Sodium Thiosulfate

§  70% ethanol

§  Lactose broth

§  Brilliant Green Lactose Bile Broth (BGLB)

IV. Pembuatan media

1.      Lactose Broth Single Strength

Komposisi             :

·         Beef extract          3,0 gr

·         Lactose                  5,0 gr

·         Pepton                   5,0 gr

·         Aquadest               1 liter

Cara Pembuatan    :

a.       Larutkan bahan-bahan tersebut di atas, campur hingga larut

b.      Masukkan sebanyak 10 cc ke dalam tabung pembiakan yang berisi tabung Durham dalam posisi terbalik

c.       Tutup dengan tutup karet/kapas

d.      Sterilisasi dalam autoclave pada suhu 121˚C selama 15 menit

pH setelah sterilisasi ± 6,9.

Catatan : Untuk lactose broth double strength sama diatas, hanya   penimbangannya 2 kali lipat/double.

2.      Brilliant Green Lactose Bile Broth

Komposisi             :

·         Pepton from meat                         10 gr

·         Oxbile dried                      20 gr

·         Aquadest                           1 liter

·         Lactose                              10 gr

·         Brilliant B Green               0,0133 gr

·         Aquadest                           1 liter

Cara Pembuatan    :

a.       Larutkan bahan-bahan tersebut di atas, campur hingga larut

b.      Masukkan sebanyak 10 cc ke dalam tabung pembiakaan yang berisi tabung durham dalam posisi terbalik

c.       Tutup dengan karet/kapas

d.      Sterilisasi dalam autoclave pada suhu 121˚C selama 15 menit

pH setelah sterilisasi ± 7,2.

METODE HITUNG CAWAN BAKTERIOLOGI

METODE PERHITUNGAN CAWAN

PRINSIP HITUNGAN CAWAN

Metode yanag dapat digunakan untuk menghitung jumlah mikroba didalam bahan pangan terdiri dari metode hitungan cawan, “Most Propable Number” (MPN), dan metode hitungan mikroskopik langsung. Dari metode-metode tersebut, metode hitungan cawan yang paling banyak digunakan. Metode lainnya yang dapat digunakan untuk menghitung jumlah mikroba didalam suatu larutan adalah metode turbidimetri(kekeruhan) mengunakan spektrofotometer. Tetapi metode ini sukar diterapkan pada bahan pangan karena medium yang diukur harus bening, sedangkan estrak bahan pangan, misalnya sari buah, biasanya mengandung kompone-komponen yang menyebabkan kekeruhan, sehingga kekeruhan larutan tidak sebanding dengan jumlah mikroba yang terdapat didalamnya.

Pengenceran 

            Bahan pangan yang diperkirakan mengandung lebih dari 300 sel mikroba per ml, per g, atau per cm permukaan memerlukan perlakuan pengenceran sebelum ditumbuhkan pada medium agar dalam cawan petri ,sehinga setelah inkubasi akan terbentuk koloni pada cawan tersebut dalam jumlah yang dapat dihitung, dimana jumlah yang terbaik adalah di antara 30 dan 300. Pengenceran biasanya dilakukan secara desimal yaitu 1:10, 1:100, 1:1000, dan seterusnya, atau 1:100, 1:10000, 1:1000000 dan

Gambar 4.1     (a) contoh cara pengenceran bahan padat menggunakan pengenceran   1:10, dan (b) Contoh cara pengenceran bahan cair menggunakan pengenceran 1:100

Pengambilan contoh dilakukan secara aseptip dan pada setiap penegnceran dilakukan pengocokan kira-kira sebanyak kali untuk memisahkan sel-sel mikroba yang bergabung menjadi satu. Pengenceran secara desimal memudahkan dalam perhitungan jumlah koloni, sedangkan pengenceran yang bukan secara desimal, misalnya 1:5, 1:25, dan seterusnya jarang dilakukan karena tidak praktis dalam perhitungannya. Untuk mengetahui jumlah mikroba pada  permukaan luar bahan pangan, misanya daging sapi, ayam atau ikan, pengambilan contoh dapat dilakukan menggunakan metode usap (swab).

            Larutan  yang digunakan untuk pengenceran dapat berupa larutan fosfat buffer, larutan garam fisiologi 0,85%, atau larutan Ringer. Untuk bahan pangan yang sukar larut, kedalam larutan pengencer pertama dapat ditambahkan pasir putih atau butir-butir gelas (glass beads) yang disterilisasi  bersama  dengan larutqan pengencer tersebut. Misalnya jika contoh yang akan dianalisis adalah tepung atau pati, digunakan satu sendok pasir kedalam 90 atau 99 mllarutan pengencer pertama, sehingga sewaktu dikocok  pemecahan partikel-partikel tepung atau pati akan lebih mudah butir-butir gelas digunakan jika akan menganalisis total mikroba dari telur, sehingga bagian yang bersifat koloid pada telur dapat lebih mudah dipecahkan.

Cara Pemupukan

            Prinsip  metode perhitungan cawan adalah sebagai berikut: Jika sel mikroba yang masih hidup ditumbuhkan pada medium agar, maka sel mikroba tersebut akan berkembang biak dan membentuk koloni yang dapat dilihat langsung dengan mata tanpa menggunakan mikroskop. Metode hitungan cawan merupakan  yang paling sensitif untuk menghitung jumlah mikroba karena alas an-alasan sebagai berikut.

(1)   Hanya sel yang masih hidup dihitung

(2)   Beberapa jenis mikroba dapat dihitung sekaligus

(3)   Dapat digunakan untuk isolasi dan identifikasi mikroba karena koloni yang terbentuk mungkin berasal dari satu sel mikroba dengan penampakan pertumbuhan spesifik.

            Selain keuntungan-keuntungan tersebut, metode hitungan cawan juga mempunyai kelemahan-kelemahan sebagai berikut.

(1)               Hasil perhitungan tidak menunjukkan jumlah sel mikroba yang sebenarnya, Karena beberapa sel yang berdekatan mungkin membentuk satu koloni.

(2)               Medium dan kondisi yang berbeda mungkin menghasilkan nilai yang berbeda.

(3)               Mikroba yang ditumbuhkan harus dapat tumbuh pada medium padat dan membentuk koloni yang kompak dan jelas, tidak menyebar.

(4)               Memerlukan persiapan dan waktu inkubasi beberapa hari sehingga pertumbuhan koloni dapat dihitung.

Metode hitungan cawan dapat dibedakan atas dua cara yaitu: (1) Metode tuang (pour plate), dan (2) Metode permukaan (surface spread plate).

(1)           Metode Tuang (pour plate)

             Dari pengenceran yang dikendaki, sebanyak 1 ml atau 0.1 ml larutan tersebut (lihat gambar 4.1) dipipet kedalam cawan petri menggunakan pipet 1 ml atau 1.1 ml. sebaiknya waktu antara dimulainya pengenceran sampai menuangkan kedalam cawan petri tidak boleh lebih lama dari 30 menit.

             Kemudian kedalam cawan tersebut dimasukkan agar cair steril yang telah didinginkan sampai 50 ⁰C sebanyak kira-kira 15 ml. Selama penuangan medium, tutup cawan tidak boleh dibuka terlalu lebar untuk menghindari kontaminasi dari luar. Segera setelah penuangan, cawan petri digerakkan diatas meja secara hati-hati untuk menyebarkan sel-sel mikroba secara merata, yaitu dengan gerakaqn melingkar atau gerakan seperti angka delapan, setelah agar memadat, cawan-cawan tersebut dapat diinkubasikan didalam incubator dengan posisi terbalik.

            Inkubasi dilakukan pada suhu dan waktu tertentu sesuai dengan jenis mikroba yang akan dihitung. Medium agar yang digunakan juga disesuaikan dengan dengan jenis mikroba yang akar ditumbuhkan. Selama inkubasi, sel-sel yang masih hidup akar tumbuh dan membentuk koloni yang dapat terlihat langsung oleh mata.

            Setelah akhir masa inkubasi, koloni yang berbentuk dihitung. Setiap koloni Setiap koloni dapat dianggap berasal dari satu sel yang membela menjadi banyak sel, meskipun mungkin juga berasal dari satu sel yang letaknya berdekatan. Perhitungan jumlah koloni dapat dilakukan menggunakan “Quebec Colony  Counter”. Ketelitian akan lebih tinggi jika dilakukan pemupukan secara duplo, yaitu menggunakan dua cawan petri untuk setiap pengenceran.

(2)          Metode Permukaan (Surface/Pour Plate)

            Pada pemupukan dengan metode permukaan, agar steril terlebih dahulu dituangkan kedalam cawan petri steril dan dibiarkan membeku. Setelah membeku dengan sempurna, kemudian sebanyak 0.1 ml contoh yang telah diencerkan dipipet pada permukaan agar tersebut. Sebuah batang gelas melengkung (hockey stick) dicelupkan kedalam alcohol 95% dan dipijarkan sehingga alcohol habis terbakar. Setelah dingin, batang gelas tersebut digunakan untuk meratakan contoh diatas medium agar dengan cara  memutarkan cawan petri diatas meja. Selanjutnya inkubasi dilakukan seperti pada metode tuang. Tetapi harus diingat bahywa jumlah contoh yang ditumbuhkan hanya 0.1 ml, tidak boleh 1 ml, jadi harus dimasukkan kedalam perhitungan pengenceran untuk mendapatkan “Total Count”.

Cara Menghitung Koloni

            Perhitungan jumlah koloni akan lebih mudah dan cepat jika pengenceran dilakukan secara decimal. Sebagai contoh misalnya penetapan jumlah mikroba susu. Pengenceran awal 1:10 (=10^-1) dibuat dengan cara mengencerkan 1 ml susu kedalam 9 ml larutan pengencer, dilanjutkan dengan pengenceran yang lebih tinggi misalnya sampai 10^-5 atau 10^-6, tergantung pada mutu susunya. Semakin tinggi jumlah mikroba yang terdapat didalam susu, semakin tinggi pengenceran yang harus dilakukan. Jika setelah inkubasi misalnya diperoleh 60 dan 64 koloni masing-masing pada cawan duplo yang mengandung pengenceran 10^-4, maka jumlah koloni dapat dihitung sebagai berikut (1 ml larutan pengenceran dianggap mempunyai berat 1 kg):

Faktor pengenceran          =  Pengenceran   x   Jumlah yang ditumbuhkan.

                                         =  10^-4   x   1.0

                                         =  10^-4

Jumlah koloni                         =  Jumlah koloni   x   1/Faktor Pengenceran per `  `                                                       cawan

                                         =  (60  +  64)/2   x   1/10^-4

                                         = 6.2  x   10⁵

STANDAR PERHITUNGAN

            Untuk suatu hasil analisis mikrobiologi digunakan suatu standar yang disebut “Standard Plate Count” (SPC), yang menjelaskan mengenai cara menghitung koloni pada cawan serta cara memiliki data yang ada menghitung jumlah koloni didalam suatu contoh,,

            Cara menghitung koloni pada cawan  adalah sebagai berikut:

1.                       Cawan yang dipilih dan dihitung adalah yang mengandung jumlah koloni anatara 30 dan 300.

2.                  Bebearapa koloni bergabung menjadi satu merupakan suatu kumpulan koloni yang besar dimana jumlah koloninya diragukan, dapat dihitung sebagai satu koloni.

3.                  Suatu deretan (rantai) koloni yang terlihat sebagai  suatu garis tebal dihitung sebagai satu koloni.

Data yang dilaporkan sebagai SPC harus mengikuti peraturan-peraturan sebagai berikut:

1.            Hasil yang dilaporkan hanya terdiri dari dua angka, yaitu angka petama didepan koma dan angka kedua dibelakang koma. Jika angka yang ketiga sama dengan atau lebih besar dari 5, Harus dibulatkan satu angka lebih tinggi pada angka yang kedua.

Jumlah koloni                         “Standard Plate                       Keterangan

Per pengenceran                             Count”

10^-2       10^-3        10^-4  

234

                                                                                                                      

125

            28          1                   2.3  x   10⁴                            28 dan 1<30

197

  700                  10                 1.3  x  10⁵                            700>300;10<30

TBUD            TBUD                        2.0  x   10⁶                           TBUD>300

TBUD = Terlalu banyak untuk dihitung

2.             Jika semua pengenceran yang dibuat untuk pemupukan mengahasilkan angka kurang dari 30 koloni pada cawan petri, hanya jumlah koloni pada pengenceran terendah yang dihitung. Hasilnya dilaporkan nsebagai kurang dari 30 dikalikan dengan besarnya pengenceran, tetapi jumlah yang sebenarnya harus dicantumkan dalam tanda kurung.

Jumlah koloni                         “Standard Plate                       Keterangan

Per pengenceran                              Count”

10^-2     10^-3      10^-4

16

                                                                                                                      

             1        0                      <3.0 x  10³                   Hitung pengenceran

                                               (1.6  x  10³)                             10^-2

3.            Jika semua pengenceran yang dibuat untuk pemupukan mengahasilkan lebih dari 300 koloni pada cawan petri, hanya jumlah koloni pada pengenceran yang tertinggi yang dihitung, misanya dengan cara menghitung jumlahnya pada 1/4 bagian cawan petri, kemudian hasilnya dikalikan empat. Hasilnya dilaporkan sebagai lebih dari 300 dikalikan dengan besarnya pengenceran, tetapi jumlah yang sebenarnya harus dicantumkan dalam tanda kurung.

Jumlah koloni                         “Standard Plate                       Keterangan

Per pengenceran                           Count”

.10^-2       10^-3        10^-4

355

                                                                                                                      

TBUD               TBUD                      >3.0    x  10⁶                Hitung pengenceran

325

                                                  (3.6  x  10⁶⁾               10^-4

TBUD                   20             >3.0    x   10⁵               Hitung Pengenceran

                                                   (3.3 x   10⁵)             10^-3

4.            Jika cawan dari dua tingkat pengenceran menghasilkan koloni dari tingkat pengenceran menghasilkan koloni dengan jumlah antara 30 dan 300, dan perbandingan antara hasil tertinggi dan terendah dari kedua pengenceran tersebut lebih kecil atau sama dengan 2, tentukan rat-rata dari kedua nilai tersebut dengan memperhitungkan pengencerannya. Jika perbandingan antara hasil tertinggi dan terendah lebih besar dari 2, yang dilaporkannya hanya hasil yang terkecil.

Jumlah koloni                         “Standard Plate                       Keterangan

Per pengenceran                           Count”

.10^-2       10^-3        10^-5

                                                                                                                      

41

293

                             4                3.5  x   10⁴                   Hitung rata-ratanya

                                                                                   Karena 41000/29300

                                                                                   = 1.4 (<2)

140

                32         2                1.4   x   10⁴                    Hitung pengenceran

                                                                                   10² karena 32000/

                                                                                   14000 = 2.3 (>2)

5.           Jika digunakan dua cawan petri (duplo) per pengenceran, data yang diambil dari kedua cawan tersebut, tidak boleh diambil salah satu, meskipun salah satu dari cawan duplo tersebut tidak memenuhi syarat diantara 30 dan 300.

Jumlah koloni                         “Standard Plate                       Keterangan

Per pengenceran                           Count”

.10^-2       10^-3        10^-4

  

175  208

                                                                                                                      

               16           1               1.9  x   10⁴                         Rata-rata dari peng-

               17           0                                                   enceran 10^-2

Jumlah koloni                         “Standard Plate                       Keterangan

Per pengenceran                           Count”

.10^-2       10^-3        10^-4

138  162

                                                                                                                      

              42            2               1.5       x   10⁴              Rata-rata dari peng-

              43            4                                                   enceran 10^-2 karena

                                                                                   Perbandingan antara

                                                                                   Pengenceran 10^-3 dan

                                                                                   10^-4 adalah 2.4

290   280

36      32

 

                                4             3.1     x    10⁴                Rata-rata dari peng-

                                1                                                 Enceran 10^-2 dan 10^-3

                                                                                   Karena perbandingan

                                                                                   Antara kedua peng-

219   305

                                                                                   Enceran adalah 1.2.

                25           3              3.0     x    10⁴               Rata-rata dari peng-

                27          0                                                   enceran 10^-2 meskipun

                                                                                   305>300 (angka yang

                                                                                   Yang lain <30).

TOTAL MIKROBA BERDASARKAN KELOMPOK

Total mikroba

          Prinsip hitungan cawan dapat digunakan untuk menghitung jumlah mikroban didalam contoh, yaitu dengan  menggunakan Plate Count Agar (PCA) sebagai medium pemupukan.

          PCA  adalah suatu medium yang mengandung 0.5% tripton, 0.25% estrak khamir dan 0.1% glukosa sehingga semua mikroba termasuk bakteri, kapang dan khamir dapat tumbuh dengan baik pada medium tersebut.

Total Bakteri

          Untuk menghitung total bakteri dengan metode hitungan total bekteri dengan metode hitungan cawan digunakan Nutrient Agar (NA). NA adalah satu medium yang mengandung jsumber nitrogen dalam jumlah cukup yaitu 0.3% ekstrak sapid an 0.5% pepton, tetapi tidak mengandung sumber karbohidrat, oleh karena itu baik untuk pertumbuhan bakteri tetapi kapang dan khamir tidak dapat  tumbuh dengan baik.

Total Spore Bakteri

            Untuk menghitung jumlah spora bakteri pada contoh makanan, suspense contoh harus dipanaskan terlebih dahulu untuk membunuh sel vegenatif bakteri, kapang dan khamir maupun spora kapang dan khamir. Jumlah spora bakteri di dalam contoh dapat dihitung meggunakan metode hitungan cawan setelah contoh dipanaskan pada suhu 80’C selama 10 menit. Jika yang akan dihitung hanya spora yang tahanpanas (termoresistan), termasuktermofil, pemanasan dilakukan pada suhu yang lebih tinggi yaitu 100’C selama 10 menit (Gambar 4.2). medium yang digunakan untuk spora aerobic adalah Nutrient  Agar, sedangkan untuk spora anaerobic dapat digunakan Chopped Meat  Medium (prereduced).

            Khusus untuk menghitung jumlah spora termofil aerobic penyebab busuk asam tanpa gas dan spora termofil anaerobic pembentuk hydrogen sulfide dapat dilihat pada Bab 6 (Termofil).

Total Kapang Dan Khamir

            Jumlah Kapang dan Khamir di dalam contoh makanan dapat dihitung dengan metode hitungan cawan menggunakan medium Potato Dextrose Agar (PDA). Jika di dalam contoh diduga mengandung juga bakteri dalam jumlah tinggi,maka pertumbuhan bakteri dapat dihambat dengan menambahkan asam tartarat 10% steril kedalam PDA setelah sterilisasi. Jumlah yang ditambahkan biasanya adalah 1 ml asam tartarat 10% kedalam setiap 100 ml PDA steril.

            DA adalah suatu medium yang mengandung sumber karbohidrat dalam jumlah cukup, yaitu terdiri dari 20% ekstrak kentang dan 2% glukosa sehingga baik untuk pertumbuhan kapang dan khamir tetapi kurang baik untuk pertumbuhan bakteri. Akan tetapi karena beberapa bakteri juga menfementasi karbohidrat dan menggunakannya sebagai sumber energy, maka beberapa bakteri masih mungkin tumbuh PDA. Dengan menurunkan pH PDA menjadi kira–kira 3.5, pertumbuhan bakteri akan terhambat karena pada umumnya bakteri tidak dapat tumbuh. Pada pH kurang 4.0. PDA yang telahdiasamkantersebutdisebut Acidified Potato Dextrose Agar (APDA)

Mikroba di dalam Contoh Pemanasan 80’ . 10 menit Pemanasan      100’. 10 menit

SporaBakteri

SporaTennoresistan (termasuktermofil)

Sel vegetative mati

Spora termolabil mati

 

Gambar 4.2 perlakuan pemanasan pada pengujian jumlah spora bakteri

KOMPOSISI MEDIUM

Nutrient Agar (NA)          :  Ekstraksapi                                                                                               3 g

                                                   Pepton                                                                                                       5 g

Gambar 4.2. Perlakuan pemanasan pada pengujian jumlah spora bakteri

Komponen Agar (NA)     :  Estrak sapi                                                                                                3 g                                

Plate count Agar (PCA)  :  Tripton                                                                                                      5 g

                                                   Ekstrakkhamir                                                                                                    1.5 g

                                                   Dekstrosa                                                                                                 1 g

                                                    Agar                                                                                                        15 g

                                                    Air destilata                                                                                   1000ml

                                                     pH                                                                                                            7.0

Potato. Dextrosa Agar       :Infusi kentang                                                      200 g

            (PDA)                    Deskstrosa                                                              20 g

                                           Agar                                                                        15 g

                              Air destilasi                                                         800ml  

Acidified PDA (APDA):   Komposisi seperti PDA, tetapi setelah   

                                               Sterilisasi, pHnya diatur menjadi 3,5-4,0

                                               Dengan larutan asam tartrat 10%. Biasanya di butuhkan 1 ml larutan asam tartrat 10% dalam 100ml PDA.